摘要安必平DNA荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization，FISH)技术是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示DNA序列位置的方法。该技术具有快速、安全、灵敏度高以及探针可长期保存等特点，目前已广泛应用于细胞遗传学、肿瘤生物学、基因定位、基因作图、基因扩增,产前诊断及哺乳动物染色体进化研究等领域。

1.FISH技术的产生年Gall和Pardue利用放射性同位素标记的DNA探针检测细胞制片上非洲爪蟾细胞核内的rDNA获得成功之后，Pardue等同年又以小鼠卫星DNA为模板，利用体外合成的含3H的RNA为探针成功地与中期染色体标本进行了原位杂交，从而开创了RNA-DNA的同位素原位杂交技术，但是没有得到广泛应用。年Evans第一次将染色体显带技术和原位杂交技术结合起来，提高了基因定位的准确性。年，Langer等首次采用生物素标记的核苷酸探针(bio-dUTP)成功地进行了染色体原位杂交，建立了非放射性原位杂交技术(Nonisotopicinsituhybridization)，至此，以荧光标记的探针在细胞制片上进行基因原位杂交的技术建立起来。年这项技术被引进到植物。年，Cremer与Licher等分别证实了荧光原位杂交技术应用于间期核检测染色体非整倍体的可行性，从而开辟了间期细胞遗传学研究。2.FISH的原理荧光原位杂交技术原理是将DNA探针用生物素和毛地黄毒苷等荧光染料标记，然后将标记的探针直接原位杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异结合，通过荧光杂交信号来检测DNA序列在染色体或DNA纤维上的定位、定性、相对定量分析。与其他原位杂交技术相比，荧光原位杂交具有很多优点，主要体现在：①FISH不需要放射性同位素作探针标记，安全性高;②FISH的实验周期短，探针稳定性高;③FISH能通过多次免疫化学反应，使其杂交信号明显增强，从而提高灵敏度，检测的灵敏度接近同位素探针杂交;④FISH的分辨率高达3-20Mb;⑤FISH可以用不同修饰核苷酸分子标记不同的DNA探针，再用不同的荧光素分子检测不同的探针分子，因此可以在荧光显微镜下在同一张切片上同时观察几种DNA探针的定位，直接得到它们的相关位置和顺序，从而大大加速生物基因组和功能基因定位的研究。3.FISH技术的发展在20世纪90年代，FISH在方法上逐步形成了从单色向多色、从中期染色体FISH向粗线期染色体FISH再向fiber-FISH的发展趋势，灵敏度和分辨率也有了大幅度的提高。3.1多色荧光原位杂交(M-FISH)多色原位杂交(M-FISH)，“M”分别代表“Multicolor”、“Multiplex”和“Multitarget”3种类型。M-FISH的最大特点是：可将多次繁琐的FISH实验和多种不同基因的定位在一次FISH实验中完成。Cremer等用生物素和汞或氨基乙酰荧光素(AFA)标记探针建立了双色FISH技术。年Nederlof等提出用3种荧光素探测3种以上的靶位DNA序列，创建了多色FISH方法。以下五种方法是在多彩色FISH基础上发展起来的新技术：染色体描绘(chromosomepainting)、比较基因组杂交(







































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