生物实验摄作人作品展19BlueN

作品名称

BlueNative-PAGE

创作团队

负责人:李冰瑶

队员:常伟东刘昊杜乐乐马聪谷文书高继

指导老师

郝亚琦

作品简介

BlueNativePAGE(BN-PAGE)年创立的种从生物样品(质膜,胞浆等)中分离蛋白质复合物的电泳技术,能分离10KD-10MKD范围内的蛋白质以及蛋白质复合物。

BN-PAGE以考马斯亮蓝G代替SDS使蛋白质复合物带负电荷,根据各个不同复合物分子量不同从而在胶中得到分离。这些复合物在胶中以蓝色条带形式呈现。样品用些温和的去污剂如dodecylmaltoside(DM,TritonX-和毛地黄皂苷(digitonin)等溶解,从而使复合物以近似天然的状态分离。蛋白质表面结合了大量的考马斯亮蓝染料而带上负电荷,这会导致即使碱性蛋白在?pH7.5条件下也会向阴极迁移。但是,蛋白质虽然带有大量的负电荷,然而其分离依据的根本还是根据不连续的凝胶梯度-凝胶孔径的逐渐减小,蛋白质最终迁移到其自身大小与凝胶孔径相近似的位置而停止。Blue?Native?PAGE在分析蛋白质-蛋白质相互作用以及膜蛋白复合物方面有很大的优势。

在本视频中,以叶绿体类囊体膜上光合复合体蛋白为材料来展示BlueNativePAGE在实际中的使用方法。因此也涉及拟南芥植物采集和叶绿体粗提的实验步骤。

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